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桶裝水中銅綠假單胞菌檢測及控制

發(fā)布時間:2021-04-16點擊量: 1117作者:陜西欣諾華生物

銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種重要的水源性條件致病菌,廣泛存在于各類型水中,欣諾華生物工程師提示大家,因為對消毒劑、干燥、紫外線燈理化因素具有較強的抵抗力,可引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。近年來,銅綠假單胞菌污染桶裝水的情況報道較多,是市面上包裝飲用水zui容易出現(xiàn)的質(zhì)量問題;2018年山東、江蘇、貴州、廣東等多省市瓶(桶)裝飲用水不合格率高發(fā),主因是銅綠假單胞菌超標嚴重,該項目政府抽檢不合格率遠超其他抽檢項目,質(zhì)量安全問題十分嚴重,主要原因是生產(chǎn)企業(yè)沒有做好日常生產(chǎn)過程的微生物監(jiān)控,生產(chǎn)過程的消毒效果缺乏準確的驗證方法,使得生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量失控。

根據(jù)GB8538-2016食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法是國家zui新公布的針對包裝飲用水銅綠假單胞菌的檢驗方法,檢驗程序如下:

標準的檢測過程寫的比較精煉,對于一般生產(chǎn)企業(yè)的檢測人員來說在實際的檢測過程中,會遇到比較多的問題,以下來對其中的可能的檢測難點一一說明并推薦相應的解決辦法。

具體操作步驟

1 水樣過濾

取好的水樣需在100級的潔凈工作臺用0.45um的濾膜進行抽濾,將微生物截留在濾膜上,再將濾膜貼在CN瓊脂培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),應避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留氣泡。

這個步驟中有兩個方面檢測方法中未說明,一是采用何種濾器和如何滅菌,二是濾膜如何滅菌。

包裝水生產(chǎn)企業(yè)可以購買專用的多聯(lián)不銹鋼過濾系統(tǒng),一般材質(zhì)是不銹鋼的,可以用牛皮紙包好后直接放入滅菌鍋內(nèi)進行滅菌;也可以購買常見的砂芯過濾器,同樣可以用牛皮紙包好后放入滅菌鍋滅菌;如果需要使用的濾器數(shù)量較多,可以采用高溫火焰噴槍灼燒方式滅菌,也可起到滅菌效果。濾膜可采用一次性無菌濾膜。

多聯(lián)不銹鋼過濾系統(tǒng)

無菌濾膜

無菌微孔濾膜

2 濾膜在CN瓊脂培養(yǎng)和觀察

CN瓊脂培養(yǎng)后的菌落形態(tài)分以下三種,其它情況為非銅綠假單胞菌:

(1)藍色或綠色的典型可疑菌落,直接做綠膿菌素的確證性實驗,這個現(xiàn)象比較明顯,也容易辨認;

CN培養(yǎng)基上綠色菌落

綠膿菌素確證

(2)非藍綠色而在365nm紫外燈照射下產(chǎn)熒光的菌落,這種類型的可疑菌落需進行乙酰胺肉湯確證性實驗;

CN培養(yǎng)基上非藍綠色而在365nm紫外燈照射下產(chǎn)熒光的菌落

乙酰胺確證試驗

(3)是紅褐色菌落紫外燈照射下也不產(chǎn)熒光,需進行氧化酶測試、乙酰胺液體培養(yǎng)基確證,金氏B培養(yǎng)基確證。

所有三種情況均需接種到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進行純化。

根據(jù)日常檢測數(shù)據(jù)的統(tǒng)計,前兩種的情況較多,第三種情況zui少,而第二種即非藍/綠色的產(chǎn)熒光的菌落zui具有迷惑性,也是檢驗的難點所在,需要特別仔細的進行驗證。

典型菌落的形態(tài)周圍呈現(xiàn)融化的狀態(tài),菌落數(shù)較少的情況下,劃線純化比較簡單;菌落數(shù)較多的情況劃線就比較麻煩了,因為第一種典型可疑菌落是直接目測能看到的,而第二種情況產(chǎn)熒光是需要在360nm的紫外燈照射下才能看見是否產(chǎn)熒光,這就會可能導致劃線純化的時候可疑和典型菌落出現(xiàn)混淆錯劃的情況,會導致結(jié)果的截然不同。例如:挑取藍綠色可疑菌落純化時,因菌落溶解狀擴大,可能挑取時不僅挑取到了藍綠色可疑菌落,還挑取到其他類型可疑菌落,純化后確證就可能導致結(jié)果完全改變的情況,解決辦法是在這種菌落較多的情況下,可以采取計數(shù)后分開再在CN瓊脂平板上劃線一次,先在CN瓊脂平板上分離中上述幾種菌落的單個菌落,再劃線接種到營養(yǎng)瓊脂平板上純化后進行確證試驗,已避免因挑取典型菌落出現(xiàn)差錯導致結(jié)果的偏差。

3 確證性試驗

這里需特別注意的是上述的第二種情況,即非藍/綠色產(chǎn)熒光的可疑菌落的產(chǎn)氨實驗:

純培養(yǎng)物接種到乙酰胺液體培養(yǎng)基36℃培養(yǎng)20~24h后,滴加1~2滴鈉氏試劑,檢查產(chǎn)氨實驗,有出現(xiàn)從深黃色到磚紅色的顏色變化,則為陽性,否則為陰性。

在實際過程中會發(fā)現(xiàn)確證試驗出現(xiàn)這種顏色變化過程的比例很高,是很多都是陽性結(jié)果

經(jīng)過使用生化試劑條鑒定發(fā)現(xiàn)有近六成的比例并不是銅綠假單胞菌,是什么原因呢,主要是時間的問題,時間比較久時,磚紅色出現(xiàn)的幾率比較高,會影響檢測人員的判斷,建議在3~5分鐘內(nèi)進行觀察,并且一定要與陽性和陰性對照菌株進行比較觀察,可有效降低誤判。另外推薦一種簡單的方法:如覺得還有疑問不能判定,可以從純培養(yǎng)物接種劃線到固體乙酰胺培養(yǎng)基進行培養(yǎng),銅綠假單胞菌在固體培養(yǎng)基上的特征是灰白色,扁平,邊緣不整齊,菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色,可以結(jié)合固體和液體培養(yǎng)基的生長特征和現(xiàn)象進行判定,誤判基本可以消除,此方法成本很低,一般的生產(chǎn)企業(yè)可以使用。

銅綠假單胞菌的污染主要來自三個方面,一是水源的污染,二是加工過程的污染,三是包裝材料的污染,作為生產(chǎn)企業(yè),需要通過提高自身的檢測能力,分別監(jiān)測這三個方面的污染情況,采取有效的消毒滅菌方式,并驗證滅菌效果,可確保生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量安全有保障。

欣諾華生物—清潔消毒產(chǎn)品專業(yè)制造商:陜西欣諾華生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)食品接觸用消毒劑,食品管道CIP清洗劑產(chǎn)品,可為客戶提供完整的清潔消毒解決方案,主要產(chǎn)品有三橋牌食品工業(yè)酸性清洗劑,三橋牌食品工業(yè)堿性清洗劑,三橋牌CIP酸堿清洗劑,三橋牌食品級過氧乙酸消毒液,欣諾華牌食品級二氧化氯消毒粉,欣諾華牌食品級次氯酸鈉消毒液,欣諾華牌食品級過氧化氫消毒液,欣諾華牌食品級75%酒精消毒液,欣諾華牌復合季銨鹽消毒液,欣諾華牌過氧化氫銀離子消毒液產(chǎn)品,公司始創(chuàng)于1994年,已經(jīng)為全國200多家食品加工企業(yè)提供了相應的產(chǎn)品和服務。



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